مقاله27_بررسی مولکولی استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس و - دانلود رایگان
دانلود رایگان
دانلود رایگان
| مقاله27_بررسی مولکولی استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس و استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوسفهرست مطالب عنوان صفحه چکیده1 فصل اول. 2 کلیات 2 1ـ 1 مقدمه. 3 1ـ 2 تاريخچه باکتري استافيلوکوکوس.. 3 1ـ 3 جنس باکتري استافيلوکوکوس:5 جدول 1ـ 1) نحوه کلونيزاسيون و بيماريزائي استافيلوکوکوس در انسان (4)6 1ـ 4 طبقه بندي. 7 جدول 1ـ 2) مقايسه خصوصيات سه گونه استافيلوکوکوس مهم پزشکي (22)7 1ـ 5 مورفولوژي سلول. 8 1ـ 6 خصوصيات کشت.. 8 1ـ 7 متابوليسم. 9 1ـ8 تنفس... 10 1ـ 9اپيدميولوژي. 10 1ـ 10 خصوصيات ژنتيکي. 11 1ـ 11 بيماري زايي. 12 1ـ 12تشخيص آزمايشگاهي. 14 1ـ 12ـ 1 نمونه برداري:14 1ـ 12ـ 2 کشت و رنگ آمیزی گرم14 1ـ 12ـ 3 آزمایشات تفکیکی. 15 1ـ 13 درمان. 15 جدول 1ـ 3) رژيم درماني عفونت هاي ايجاد شده توسط استافيلوکوکوس هاي مقاوم به متي سيلين (5،34)16 1ـ 14 مقاومت به عوامل ضد ميکروبي. 17 1ـ 14ـ 1 مقاومت به متي سيلين. 18 1ـ 14ـ 1ـ 1 تاريخچه و اپيدميولوژي. 18 شکل 1ـ 1) مکانيسم انتقال افقي ژن mecA به ساير باکتري ها.19 1ـ 14ـ 2 خصوصيات مقاومت به متي سيلين. 20 1ـ 14ـ 2ـ 1 مقاومت هتروژنوز (Heterogeneous resistance):20 1ـ 14ـ 2ـ 2 مقاومت هموژنوز(Homogenous resistance)20 جدول 1ـ 4) مشخصات مربوط به مقاومت به متي سيلين در استافيلوکوکوس (34)21 1ـ 14ـ 3 روش هاي تشخيص مقاومت به متي سيلين. 21 1ـ 14ـ 3ـ 1 روش هاي فنوتيپي. 21 1ـ 14ـ 3ـ 1ـ 1 Disk diffusion. 21 1ـ 14ـ 3ـ 1ـ 2 Broth microdilution. 22 1ـ 14ـ 3ـ 1ـ 3 Agar screen. 23 جدول 1ـ 5) تست هاي حساسيتي توصيه شده براي استافيلوکوک های کوآگولاز منفی و استافيلوکوک اورئوس مقاوم به متي سيلين (34)24 1ـ 14ـ 3ـ 2روش هاي مولکولي. 24 1ـ 14ـ 3ـ 2ـ 1 استخراج DNA (DNA extraction)25 1ـ 14ـ 3ـ 2ـ 2شکستن سلول (Cell lysis)25 1ـ 14ـ 3ـ 2ـ 3 رسوب DNA(DNA Sedimentation)25 1ـ 14ـ 3ـ 2ـ 4 تخلیصDNA (Purification of DNA)26 1ـ 14ـ 3ـ 2ـ 5 رسوب پروتئين ها (Sedimentation of proteins)26 1ـ 14ـ 3ـ 2ـ 6 جدا کردن DNA از RNA.. 26 1ـ 14ـ 3ـ 3PCR (Polymerase Chain Reaction)26 1ـ 14ـ 3ـ 3ـ 1 اصول کلي انجام PCR.. 27 1ـ 14ـ 3ـ 3ـ 2 انواع مختلف PCR.. 28 1ـ 15 بررسي متون. 28 1ـ 16 اهميت پژوهش... 31 فصل دوم. 33 مواد و روش ها33 2ـ 1 نوع پژوهش... 34 2ـ 2 جمعيت مورد مطالعه. 34 2ـ 3 معيار ورود به مطالعه. 34 2ـ 4 معيار خروج از مطالعه. 34 2ـ 5 روش نمونه گيري. 34 2ـ 6 مکان وزمان تحقيق. 34 جدول 2ـ 1) متغيرها35 2ـ 7 روش جمع آوري نمونه ها35 2ـ 8 محدوديت هاي تحقيق. 36 جدول 2ـ 2)لیست دستگاه هاي مورد استفاده37 جدول 2ـ 3) مواد و محیط های کشت لازم جهت تشخیص استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس وساپروفیتیکوس 38 2ـ 9 مواد و محيط هاي کشت جهت جداسازي و تشخيص... 38 2ـ 9ـ 1 محيط کشت تريپتيکاز سوي براث TSB ( Trypticase Soya Broth)38 2ـ 9ـ 2 محيط کشت بلاد آگار (Blood Agar)39 2ـ 9ـ 3 محيط کشت دوفازی خون. 39 2ـ 9ـ 4 آب اکسيژنه. 40 2ـ 9ـ 5 پلاسماي ليوفيليزه خرگوش.. 40 2ـ 9ـ 6 مواد ومحلول هاي رنگ آميزي گرم40 2ـ 9ـ 7 دیسکهای لازم برای تفکیک.. 40 جدول 2ـ 4) لیست مواد و محیط های کشت جهت آنتی بیوگرام40 2ـ 10 مواد و محيط هاي کشت جهت تعيين مقاومت آنتي بيوتيکي. 41 2ـ 10ـ 1 محيط مولر هينتون آگار(Mueller Hinton Agar)41 2ـ 11 مواد و محيط هاي کشت لازم جهت نگهداري سويه هاي جمع آوري شده41 2-12 کشت و جداسازي و تعيين هويت باکتري ها42 2ـ 13 آزمايشات لازم جهت تشخيص افتراقي استافيلوکوکهای اپیدرمیدیس وساپروفیتیکوس.. 42 2ـ 13ـ 1 تست کاتالاز. 42 2ـ 13ـ 2 تست کواگولاز. 43 2ـ 14 تست بررسی مقاومت به متی سیلین به روش فنوتیپی (Disk diffusion)44 2ـ 15 روش مولکولي جداسازي ژن mecA.. 44 2ـ 15ـ 1 استخراج DNA.. 44 2ـ 15ـ 2 بررسي کمي و کيفي DNA استخراج شده45 جدول 2ـ 5)مواد و وسايل مورد نيازجهت انجامPCR و الکتروفورز. 46 2ـ 16 طراحي، ساخت و آماده سازي پرايمرها47 جدول 2ـ 6) پرايمرهاي مورد استفاده برای انجام Multiplex PCR.. 47 2ـ 17 روش انجام PCR بر روي نمونه ها47 جدول 2ـ 7) غلظت و مقادير به کار رفته براي هر نمونه در واکنش Multiplex PCR.. 48 جدول 2ـ 8) برنامه دمايي دستگاه ترموسايکلر براي انجام واکنش زنجيره اي پليمراز Multiplex PCR))49 2ـ 18 الکتروفورز محصول PCR و عکسبرداري از آن. 49 2ـ 18ـ 1 ژل پلي اكريل آميد. 49 2ـ 18ـ 2بافر الكتروفورز. 50 2ـ 18ـ 3 بافر لودينگ.. 51 2ـ 18ـ 4 مواد و ساخت ژل پلي اكريل آميد. 51 2ـ 18ـ 4ـ 1 طرز ساخت ژل پلي آکريل آميد. 52 2ـ 18ـ 4ـ 2 بارگذاري محصولات PCR درون ژل. 52 2ـ 18ـ 5 انجام الکتروفورز. 53 2ـ 18ـ 6 رنگ آميزي ژل پلي اکريل آميد با نيترات نقره و مشاهده باندهاي DNA.. 54 فصل سوم. 55 نتایج55 3ـ 1 نتایج. 56 جدول 3ـ 1:فراوانی ودرصد نوع نمونه. 56 3ـ 2 بررسی فراوانی نوع نمونه. 56 جدول 3ـ 2: فراوانی استافیلوکوکوس های اپیدرمیدیس و ساپروفیتیکوس در بیمارستان های هاجر(س) و آیت الله کاشانی 57 3ـ 3 بررسی فراوانی استافیلوکوکوس های اپیدرمیدیس و ساپروفیتیکوس در بیمارستان هاجر(س) و آیت الله کاشانی 57 3ـ 4بررسي شيوع مقاومت فنوتیپی و ژنوتیپی (شيوع ژن mecA)57 جدول 3ـ 3: فراوانی مقاومت به متی سیلین و شیوع ژن mecA در بیمارستان های هاجر(س) و آیت الله کاشانی 58 جدول 3ـ 4 نتایج آنتی بیوگرام (فراوانی مقاومت به متی سیلین و وانکومایسین)59 شکل 3ـ 1)نمایی از ژل رنگ آمیزی شده پلی اکریل آمید حاوی ژن های mecA و16S rDNAبه ترتیب از چپ به راست: ستون 1 مارکر وزنی(100bp) ، ستون 2کنترل مثبت(Staphylococcus AureusATCC 33591)، ستون های 3تا 6 نمونه های مثبت از نظر وجود هر دو ژنmecA و16S rDNA، ستون 7 کنترل منفی، ستون 8 تا 11 نمونه مثبت از نظر وجود ژن 16SrDNA و منفی از نظر وجود ژن mecA.60 شکل 3-2) تعیین توالی محصول PCR خالص شده یکی از ایزوله های استافیلوکوکوس.. 61 فصل چهارم. 62 بحث و نتیجه گیری. 62 4ـ 1 بحث.. 63 4ـ 2محدوديت هاي تحقيق. 70 4ـ 3 پيشنهاد ها71 4ـ 4 نتیجه گیری. 71 پیوست ها73 منابع 74 چکیده مواد و روشها: در این مطالعه توصیفی-تحلیلی تعداد 2900 نمونه مختلف شامل خون، ادرار و غیره از بیماران بستری در بیمارستان های هاجر (س) و آیت الله کاشانی شهرکرد جمع آوری شد. به منظور جداسازی و شناسایی استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس و استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس، نمونه ها بر روي محيط بلاد آگار کشت داده شدند. استافیلوکوکوس های کوآگولاز منفی با رنگ آمیزی گرم، تست های کاتالاز و کواگولاز لوله اي مشخص شدند. متعاقباً برای تفکیک ايزوله هاي استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس و استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس، تست های اکسیداز، بررسی حساسیت به باسیتراسین و نووبیوسین مورد استفاده قرار گرفت. به این ترتیب تعداد 150 ایزوله استافیلوکوکوس های اپیدرمیدیس و ساپروفیتیکوس انتخاب شد. در مرحله بعد باکتري هاي مزبور با استفاده از روشDisk diffusion به منظور تعيين حساسيت به متی سیلین مورد بررسي قرار گرفتند. سرانجام هر ایزوله از نظر حضور ژن mecA و16SrDNA با روش Multiplex PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. يافته ها:بر اساس نتايج بدست آمده از 150 ایزوله مورد بررسی، 124 ایزوله استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس و 26 ایزوله استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس بودند. تمامی 150 ایزوله با روش Disk diffusion از نظر مقاومت به متی سیلین مورد بررسی قرار گرفتند که 70 ایزوله(66/46%) مقاوم بودند. نتایج بررسی ها با روش Multiplex PCR نشان داد که 64 ایزوله(66/42%) از استافيلوکوکوس های اپیدرمیدیس و ساپروفیتیکوس داراي ژن mecAبودند. نتيجهگيري:اين مطالعه نشان داد که مقاومت به متی سیلین و وجود ژن mecA در بيمارستان های هاجر و آیت الله کاشانی شهرکرد شیوع بالایی دارد و پیشنهاد می شود به منظور تشخیص سریع و دقیق مقاومت به متی سیلین از روش PCR استفاده شود. کلمات کليدي: استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس، استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس، مقاومت به متي سيلين، Disk diffusion و Multiplex PCR. فصل اول کلیات 1ـ 1 مقدمه 1ـ 2 تاريخچه باکتري استافيلوکوکوس 1ـ 3 جنس باکتري استافيلوکوکوس: جدول 1ـ 1) نحوه کلونيزاسيون و بيماريزائي استافيلوکوکوس در انسان (4) دریافت فایل جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید |